在生物制藥、蛋白純化與天然產(chǎn)物分離中，工業(yè)級層析柱的運(yùn)行狀態(tài)直接影響產(chǎn)品收率、純度與工藝穩(wěn)定性。長期使用中常因操作不當(dāng)、樣品污染或填料老化引發(fā)各類問題。掌握
工業(yè)級層析柱的常見問題診斷與高效解決方法，是確保其正常工作的關(guān)鍵。
1、背壓異常升高
檢查柱頭篩板堵塞或填料壓實(shí)。嘗試反向沖洗（若柱體允許）5–10倍柱體積去離子水，清除顆粒物。檢查樣品是否未過濾（建議用0.22μm濾膜預(yù)處理）。若為硅膠柱，避免使用高pH緩沖液導(dǎo)致溶膠。嚴(yán)重堵塞需拆柱更換篩板或重新裝填。
2、柱效下降或峰形拖尾
多因填料污染或溝流所致。執(zhí)行深度清洗：用1–2MNaCl溶液去除離子吸附；0.5MNaOH沖洗1小時去蛋白殘留；70%乙醇循環(huán)30分鐘殺菌去脂。若仍無效，可能填料已老化，需更換新介質(zhì)。
3、分離度降低或峰合并
檢查上樣量是否超載，減少進(jìn)樣體積或濃度。確認(rèn)流速是否過快，降低至推薦值（如300cm/h）。檢查緩沖液pH與電導(dǎo)是否準(zhǔn)確，重新配制并校準(zhǔn)。若為離子交換柱，檢查再生是否完成。
4、填料塌陷或產(chǎn)生氣泡
多因干柱或壓力驟變引起。嚴(yán)禁排干，保存時始終充滿液體。若已干裂，可嘗試低流速水化恢復(fù)。系統(tǒng)脫氣不充分會導(dǎo)致氣泡滯留，影響分離。上樣前對所有溶液進(jìn)行脫氣處理。
5、柱體泄漏或接口滲液
檢查端蓋密封圈是否老化、變形或安裝不當(dāng)。更換O型圈，涂抹硅脂增強(qiáng)密封。確認(rèn)柱體螺紋是否擰緊，但避免過力導(dǎo)致破裂。定期檢查高壓接頭與管路連接。
6、保留時間漂移
多為溫度波動或緩沖液成分變化。確保系統(tǒng)恒溫（±1℃），避免環(huán)境溫差。檢查泵混合比例是否準(zhǔn)確，定期校準(zhǔn)。確認(rèn)柱平衡是否充分（電導(dǎo)與pH穩(wěn)定），避免批次間差異。
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